Liquid Chromatography ဖြင့် Quantitative Analysis ၏ အခြေခံများနှင့် နည်းလမ်းများ

အရည် chromatography ၏ ခွဲထွက်ခြင်း ယန္တရားသည် အဆင့်နှစ်ဆင့်အတွက် အရောအနှောရှိ အစိတ်အပိုင်းများ၏ ဆက်စပ်မှု ကွာခြားချက်အပေါ် အခြေခံသည်။

ကွဲပြားသော stationary phases အရ liquid chromatography ကို liquid-solid chromatography၊ liquid-liquid chromatography နှင့် bonded phase chromatography ဟူ၍ ပိုင်းခြားထားပါသည်။အသုံးများဆုံးမှာ အရည်-အစိုင်အခဲ ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်ကို အဖြည့်ခံအဖြစ် စီလီကာဂျယ်ဖြင့် ပေါင်းစပ်ထားသော မိုက်ခရိုဆီလီကာမက်ထရစ်အဖြစ် မိုက်ခရိုဆီလီကာဖြင့် ပေါင်းစပ်ထားသော အဆင့် ခရိုမာတီဂရပ်ဖစ်ဖြစ်သည်။

စာရေးကိရိယာအဆင့်၏ပုံစံအရ၊ အရည်ခရိုမာတီဂရမ်ကို ကော်လံခရိုမာတီဂရိုက်၊ စက္ကူခရိုမာတီဂရိုက်နှင့် ပါးလွှာသောအလွှာခရိုမာတီဂရိုက်ဟူ၍ ပိုင်းခြားနိုင်သည်။စုပ်ယူမှုစွမ်းရည်အရ၊ ၎င်းကို စုပ်ယူမှုခရိုမာတိုပညာ၊ partition chromatography၊ ion exchange chromatography နှင့် gel permeation chromatography ဟူ၍ ခွဲခြားနိုင်သည်။

မကြာသေးမီနှစ်များအတွင်း၊ ခွဲထွက်ခြင်းအကျိုးသက်ရောက်မှုကို တိုးတက်ကောင်းမွန်စေရန် မိုဘိုင်းအဆင့်ကို ဖိအားမြင့်အောက်တွင် လျင်မြန်စွာစီးဆင်းစေရန် ဖိအားမြင့်အရည်စီးဆင်းမှုစနစ်ကို အရည်ကော်လံ chromatography စနစ်သို့ ပေါင်းထည့်ခဲ့ပြီး၊ ထို့ကြောင့် မြင့်မားသော (ဖိအားမြင့်အရည်ဟုလည်းခေါ်သည်) ပေါ်ပေါက်လာခဲ့သည်။

အပိုင်း
01 Liquid Chromatography of Quantitative Analysis of Principle

အရည်အသွေးကို အခြေခံ၍ အရေအတွက်ကို တိုင်းတာရန်အတွက် သန့်စင်သောပစ္စည်းများကို စံချိန်စံညွှန်းအဖြစ် လိုအပ်ပါသည်။

Liquid chromatography quantification သည် အတော်လေး ပမာဏနည်းတစ်နည်းဖြစ်သည်- ဆိုလိုသည်မှာ၊ အရောအနှောတွင်ရှိသော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုပမာဏကို သိထားသော စံနမူနာတစ်ခု၏ ပမာဏတစ်ခုမှ ခန့်မှန်းသည်

အပိုင်း
02 Liquid Chromatography ဖြင့် Quantification အတွက် အခြေခံ

တိုင်းတာထားသော အစိတ်အပိုင်း (W) ၏ ပမာဏသည် တုံ့ပြန်မှုတန်ဖိုး (A) (အမြင့်ဆုံး အမြင့် သို့မဟုတ် အမြင့်ဆုံးဧရိယာ)၊ W=f×A နှင့် အချိုးကျပါသည်။

Quantitative correction factor (f)- ၎င်းသည် အရေအတွက်တွက်ချက်ပုံသေနည်း၏ အချိုးကျကိန်းသေဖြစ်ပြီး ၎င်း၏ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာအဓိပ္ပာယ်မှာ ယူနစ်တုံ့ပြန်မှုတန်ဖိုး (အမြင့်ဆုံးဧရိယာ) မှ တိုင်းတာထားသော အစိတ်အပိုင်းပမာဏဖြစ်သည်။

ကိန်းဂဏန်းပြင်ဆင်မှုအချက်အား သိထားသောစံနမူနာပမာဏနှင့် ၎င်း၏တုံ့ပြန်မှုတန်ဖိုးတို့မှ ရရှိနိုင်သည်။

အမည်မသိ အစိတ်အပိုင်း၏ တုံ့ပြန်မှုတန်ဖိုးကို တိုင်းတာပြီး အစိတ်အပိုင်း၏ ပမာဏကို အရေအတွက် တည့်မတ်မှုအချက်ဖြင့် ရယူနိုင်သည်။

အပိုင်း
03 ပမာဏခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် အသုံးများသော ဝေါဟာရများ

နမူနာ (နမူနာ)- chromatographic ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု ပါဝင်သော အဖြေတစ်ခု။စံနှင့် အမည်မသိ နမူနာများ ခွဲခြားထားသည်။

စံချိန်စံညွှန်း- လူသိများသော အာရုံစူးစိုက်မှုရှိသော သန့်စင်သောထုတ်ကုန်။အမည်မသိနမူနာ (အမည်မသိ)- အာရုံစူးစိုက်မှုကို စမ်းသပ်ရမည့် အရောအနှော။

နမူနာအလေးချိန်- စမ်းသပ်ရမည့်နမူနာ၏ မူလအလေးချိန်။

Dilution- အမည်မသိနမူနာ၏ ပျော့ပျောင်းသည့်အချက်။

အစိတ်အပိုင်း- ပမာဏအလိုက် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရမည့် ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ် အထွတ်အထိပ်၊ ဆိုလိုသည်မှာ၊ အကြောင်းအရာမသိရသော ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု။

အစိတ်အပိုင်း ပမာဏ (Amount) : စမ်းသပ်မည့် အရာဝတ္ထု၏ ပါဝင်မှု (သို့မဟုတ်) အာရုံစူးစိုက်မှု။

Integerity - ကွန်ပျူတာဖြင့် chromatographic peak ၏ အထွတ်အထိပ်နေရာကို တိုင်းတာသည့် တွက်ချက်မှုလုပ်ငန်းစဉ်။

Calibration မျဉ်းကွေး- အစိတ်အပိုင်းအကြောင်းအရာနှင့် တုံ့ပြန်မှုတန်ဖိုး၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၏ အမည်မသိအကြောင်းအရာကို ဆုံးဖြတ်ရန် အသုံးပြုသည့် စံပမာဏတစ်ခုမှ တည်ဆောက်ထားသည့် မျဉ်းကွေးမျဉ်းကွေးတစ်ခု။

အပိုင်း
04 Liquid Chromatography ၏ အရေအတွက် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း။

1. ပမာဏခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် သင့်လျော်သော ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်နည်းလမ်းကို ရွေးချယ်ပါ-

l တွေ့ရှိထားသော အစိတ်အပိုင်း၏ အထွတ်အထိပ်ကို အတည်ပြုပြီး 1.5 ထက်ကြီးသော ကြည်လင်ပြတ်သားမှု (R) ကို ရယူပါ။

l စမ်းသပ်ထားသော အစိတ်အပိုင်းများ၏ chromatographic အထွတ်အထိပ်များ၏ ညီညွတ်မှု (သန့်ရှင်းမှု) ကို ဆုံးဖြတ်ပါ။

l နည်းလမ်း၏ ထောက်လှမ်းမှုကန့်သတ်ချက်နှင့် ပမာဏကန့်သတ်ချက်ကို ဆုံးဖြတ်ပါ။sensitivity နှင့် linear range

2. မတူညီသော ပြင်းအား၏ စံနမူနာများဖြင့် ချိန်ညှိမျဉ်းကွေးကို တည်ဆောက်ပါ။

3. အရေအတွက်နည်းလမ်းများ၏ တိကျမှုနှင့် တိကျမှုကို စစ်ဆေးပါ။

4. နမူနာစုဆောင်းခြင်း၊ ဒေတာလုပ်ဆောင်ခြင်းနှင့် ရလဒ်များအစီရင်ခံခြင်းတို့ကိုအကောင်အထည်ဖော်ရန် သက်ဆိုင်ရာ chromatography စီမံခန့်ခွဲမှုဆော့ဖ်ဝဲကို အသုံးပြုပါ။

အပိုင်း
05 ကိန်းဂဏန်းအထွတ်အထိပ်များကို ဖော်ထုတ်ခြင်း (Qualitative)၊

ပမာဏအလိုက် chromatographic peak တစ်ခုစီကို အရည်အသွေးအရ ခွဲခြားသတ်မှတ်ပါ။

ပထမဦးစွာ၊ ပမာဏသတ်မှတ်ရန် chromatographic peak ၏ ထိန်းသိမ်းချိန် (Rt) ကို ဆုံးဖြတ်ရန် စံနမူနာကို အသုံးပြုပါ။ထိန်းသိမ်းချိန်ကို နှိုင်းယှဉ်ခြင်းဖြင့် အမည်မသိနမူနာတွင် chromatographic peak တစ်ခုစီနှင့် သက်ဆိုင်သည့် အစိတ်အပိုင်းကို ရှာပါ။ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ် အရည်အသွေးဆိုင်ရာ နည်းလမ်းသည် စံနမူနာနှင့် ထိန်းသိမ်းချိန်ကို နှိုင်းယှဉ်ရန်ဖြစ်သည်။စံသတ်မှတ်ချက် မလုံလောက်ပါ။နောက်ထပ်အတည်ပြုချက် (အရည်အသွေး)

1. စံထည့်နည်း

2. တစ်ချိန်တည်းတွင် အခြားနည်းလမ်းများကို အသုံးပြုပါ- အခြားသော ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်နည်းလမ်းများ (ယန္တရားကို ပြောင်းလဲပါ- ဥပမာ- မတူညီသော ခရိုမာတီဂရပ်ဖစ်ကော်လံများကို အသုံးပြုခြင်း)၊ အခြားသော ကိရိယာများ (PDA- ရောင်စဉ်တန်းနှိုင်းယှဉ်မှု၊ ရောင်စဉ်စာကြည့်တိုက်ရှာဖွေမှု၊ MS- အစုလိုက်အပြုံလိုက် ရောင်စဉ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၊ ရောင်စဉ်စာကြည့်တိုက် ရှာဖွေမှု)

3. အခြားတူရိယာများနှင့် နည်းလမ်းများ

အပိုင်း
06 Quantitative Peak Consistency ကို အတည်ပြုခြင်း။

chromatographic peak ကိုက်ညီမှု (သန့်ရှင်းမှု) ကို အတည်ပြုပါ

chromatographic peak တစ်ခုစီ၏အောက်တွင် တိုင်းတာသည့် အစိတ်အပိုင်းတစ်ခုသာရှိကြောင်း သေချာပါစေ။

အညစ်အကြေးများ (အညစ်အကြေးများ) တို့မှ ဝင်ရောက်စွက်ဖက်ခြင်းရှိမရှိ စစ်ဆေးပါ။

Chromatographic Peak Consistency (သန့်ရှင်းမှု) ကို အတည်ပြုရန် နည်းလမ်းများ

Spectrograms များကို Photodiode Matrix (PDA) Detectors နှင့် နှိုင်းယှဉ်ခြင်း။

Peak Purity ခွဲခြားသတ်မှတ်ခြင်း။

2996 Purity Angle သီအိုရီ

PART 07 တွင် အသုံးများသော အရေအတွက်နည်းလမ်းများ

စံမျဉ်းကွေးနည်းလမ်း၊ ပြင်ပစံနည်းလမ်းနှင့် အတွင်းပိုင်းစံနည်းလမ်းဟူ၍ ပိုင်းခြားထားသည်-

1. ပြင်ပစံနည်းလမ်း: liquid chromatography တွင် အသုံးအများဆုံး

စံနမူနာများအဖြစ် စမ်းသပ်ရန် ဒြပ်ပေါင်းများ၏ သန့်စင်နမူနာများကို အသုံးပြု၍ သိရှိထားသော ပြင်းအားများ၏ စံနမူနာများကို ပြင်ဆင်ထားပါသည်။၎င်း၏တုံ့ပြန်မှုတန်ဖိုး (အမြင့်ဆုံးဧရိယာ) အထိ ကော်လံထဲသို့ ထိုးသွင်းသည်။
သတ်မှတ်ထားသော အကွာအဝေးတစ်ခုအတွင်း၊ စံနမူနာ၏ အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့် တုံ့ပြန်မှုတန်ဖိုး၊ W= f×A နှင့် စံမျဉ်းကွေးကြားတွင် ကောင်းမွန်သော ဆက်နွယ်မှုရှိသည်။

အတိအကျတူညီသောစမ်းသပ်မှုအခြေအနေအောက်တွင်၊ တိုင်းတာရမည့်အစိတ်အပိုင်း၏တုံ့ပြန်မှုတန်ဖိုးကိုရရှိရန် အမည်မသိနမူနာကို ထိုးသွင်းပါ။သိထားသော coefficient f အရ၊ တိုင်းတာရမည့် အစိတ်အပိုင်း၏ အာရုံစူးစိုက်မှုကို ရရှိနိုင်သည်။

ပြင်ပစံနည်းလမ်း၏အားသာချက်များရိုးရှင်းသော လည်ပတ်မှုနှင့် တွက်ချက်မှု ၊ ၎င်းသည် အသုံးများသော ပမာဏနည်းလမ်းတစ်ခုဖြစ်သည်။အစိတ်အပိုင်းတစ်ခုစီကို ရှာဖွေတွေ့ရှိပြီး ရွေးချယ်ရန်မလိုအပ်ပါ။စံနမူနာ လိုအပ်ပါသည်။စံနမူနာနှင့် အမည်မသိနမူနာများ၏ တိုင်းတာမှုအခြေအနေများသည် တသမတ်တည်းဖြစ်သင့်သည်။ထိုးဆေးပမာဏ တိကျရမည်။

ပြင်ပစံနည်းလမ်း၏ အားနည်းချက်များစမ်းသပ်မှုအခြေအနေများသည် detector ၏ အာရုံခံနိုင်စွမ်း၊ စီးဆင်းမှုနှုန်းနှင့် မိုဘိုင်းအဆင့်၏ ပါဝင်မှုကို မပြောင်းလဲနိုင်သကဲ့သို့ စမ်းသပ်မှုအခြေအနေများသည် မြင့်မားရန်လိုအပ်ပါသည်။ထိုးဆေးတစ်ခုစီ၏ ပမာဏသည် ကောင်းသော ထပ်ခါထပ်ခါ ဖြစ်သင့်သည်။

2. ပြည်တွင်းစံနည်းလမ်း: စံနည်းလမ်းများတွင် အများဆုံးအသုံးပြုသော တိကျသော်လည်း ဒုက္ခ

ရောစပ်စံတစ်ခုပြုလုပ်ရန် အတွင်းပိုင်းစံနှုန်းကို သိရှိထားသည့်ပမာဏကို စံနှုန်းတစ်ခုသို့ ပေါင်းထည့်ကာ သိရှိထားသည့် အာရုံစူးစိုက်မှုဆိုင်ရာ လုပ်ငန်းစံနှုန်းများကို ဆက်တိုက်ပြင်ဆင်ထားသည်။ရောစပ်စံတွင် စံနှင့်အတွင်းပိုင်းစံ၏ အံသွားအချိုးသည် မပြောင်းလဲပါ။ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်ကော်လံထဲသို့ ထိုးသွင်းပြီး တုံ့ပြန်မှုတန်ဖိုးအဖြစ် (စံနမူနာအမြင့်ဆုံးဧရိယာ/အတွင်းပိုင်းစံနမူနာအထွတ်အထိပ်နေရာကို) ယူပါ။တုံ့ပြန်မှုတန်ဖိုးနှင့် အလုပ်လုပ်စံနှုန်း၏ အာရုံစူးစိုက်မှုကြားရှိ မျဉ်းကြောင်းဆက်နွယ်မှုအရ W= f×A၊ စံမျဉ်းကွေးကို ပြုလုပ်ထားသည်။

တိုင်းတာရမည့် အစိတ်အပိုင်း၏ တုံ့ပြန်မှုတန်ဖိုးကို ရရှိရန် သိထားသော အတွင်းပိုင်းစံပမာဏကို အမည်မသိနမူနာသို့ ပေါင်းထည့်ကာ ကော်လံထဲသို့ ထိုးသွင်းသည်။သိထားသော coefficient f အရ၊ တိုင်းတာရမည့် အစိတ်အပိုင်း၏ အာရုံစူးစိုက်မှုကို ရရှိနိုင်သည်။

အတွင်းပိုင်းစံနည်းလမ်း၏ဝိသေသလက္ခဏာများ:လည်ပတ်မှုအတွင်း၊ နမူနာနှင့် အတွင်းပိုင်းစံကို ရောနှောပြီး ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်ကော်လံထဲသို့ ထိုးသွင်းထားသောကြောင့် ရောစပ်ဖြေရှင်းချက်တွင် တိုင်းတာထားသော အစိတ်အပိုင်း၏ အတွင်းစံနှုန်းနှင့် တိုင်းတာသည့် ပမာဏအချိုးသည် စဉ်ဆက်မပြတ်ရှိနေသရွေ့ နမူနာထုထည်ပြောင်းလဲမှု၊ အရေအတွက်ရလဒ်များကို ထိခိုက်စေမည်မဟုတ်ပါ။.အတွင်းပိုင်းစံနည်းလမ်းသည် နမူနာအသံအတိုးအကျယ်၏လွှမ်းမိုးမှုကို ကျော်လွန်ကာ၊ မိုဘိုင်းအဆင့်နှင့် ထောက်လှမ်းသည့်ကိရိယာကိုပင် ဆန့်ကျင်ပေးသည်၊ ထို့ကြောင့် ၎င်းသည် ပြင်ပစံနည်းလမ်းထက် ပိုမိုတိကျပါသည်။

အပိုင်း
အရေအတွက် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုရလဒ်များကို ထိခိုက်စေသော အချက်များ 08

တိကျမှု ညံ့ဖျင်းခြင်းကြောင့် ဖြစ်နိုင်သည်-

အထွတ်အထိပ် ဧရိယာ ပေါင်းစည်းမှု မှားယွင်းခြင်း၊ နမူနာပြင်ဆင်မှုအတွင်း မိတ်ဆက်ခဲ့သည့် နမူနာ ပြိုကွဲခြင်း သို့မဟုတ် အညစ်အကြေးများ၊ အလုံပိတ်မထားသော နမူနာပုလင်း၊ နမူနာ သို့မဟုတ် ပိုးမွှားများ ပြိုကွဲခြင်း၊ မမှန်ကန်သော နမူနာပြင်ဆင်မှု၊ နမူနာဆေးထိုးခြင်း ပြဿနာများ၊ မှားယွင်းနေသော အတွင်းပိုင်းစံပြင်ဆင်မှု

တိကျမှုအားနည်းခြင်းအတွက် ဖြစ်နိုင်သော အကြောင်းရင်းများ-

မမှန်ကန်သော အထွတ်အထိပ်ပေါင်းစပ်မှု၊ ဆေးထိုးခြင်း သို့မဟုတ် ထိုးဆေးပြဿနာများ၊ နမူနာပြင်ဆင်မှုအတွင်း မိတ်ဆက်ခဲ့သည့် နမူနာပြိုကွဲခြင်း သို့မဟုတ် အညစ်အကြေးများ၊ ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်ပြဿနာများ၊ ကျဆင်းသွားသော detector တုံ့ပြန်မှု