Liquid chromatography သည် ကုန်ကြမ်းများ၊ ကြားခံပစ္စည်းများ၊ ပြင်ဆင်မှုများနှင့် ထုပ်ပိုးပစ္စည်းများရှိ အစိတ်အပိုင်းတစ်ခုစီ၏ အကြောင်းအရာနှင့် အညစ်အကြေးများကို စမ်းသပ်ရန်အတွက် အဓိကနည်းလမ်းဖြစ်ပြီး၊ သို့သော် အရာဝတ္ထုအများအပြားကို အားကိုးရန် စံနည်းလမ်းများမရှိသောကြောင့် နည်းလမ်းအသစ်များကို တီထွင်ရန် မလွဲမသွေလုပ်ဆောင်ရမည်ဖြစ်သည်။ အရည်အဆင့်နည်းလမ်းများ ဖွံ့ဖြိုးတိုးတက်ရေးတွင်၊ ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်ကော်လံသည် အရည်ခရိုမာတီဂရာဂရပ်ဖစ်၏ အဓိကအချက်ဖြစ်သောကြောင့် သင့်လျော်သော ခရိုမာတီဂရပ်ဖစ်ကော်လံကို မည်သို့ရွေးချယ်ရမည်နည်း။ ဤဆောင်းပါးတွင်၊ စာရေးသူသည် ရှုထောင့်သုံးရပ်မှ အရည် chromatography ကော်လံကို မည်သို့ရွေးချယ်ရမည်ကို ရှင်းပြပါမည်- ခြုံငုံအယူအဆများ၊ ထည့်သွင်းစဉ်းစားမှုများနှင့် အသုံးချမှုနယ်ပယ်။
A.Overall စိတ်ကူးများသည် အရည် chromatography ကော်လံများကို ရွေးချယ်ခြင်း။
1. ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၏ ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာနှင့် ဓာတုဂုဏ်သတ္တိများကို အကဲဖြတ်ပါ- ဓာတုဖွဲ့စည်းပုံ၊ ပျော်ဝင်နိုင်မှု၊ တည်ငြိမ်မှု (ထိုကဲ့သို့သော ဓာတ်တိုးလွယ်ခြင်း/လျော့ချခြင်း/ ဟိုက်ဒရိုလစ်ဇစ်)၊ အချဉ်ဓာတ်နှင့် အယ်ကာလီဓာတ် စသည်တို့၊ အထူးသဖြင့် ဓာတုဖွဲ့စည်းပုံသည် အဓိကကျသည်။ conjugated group ကဲ့သို့သော ဂုဏ်သတ္တိများကို အဆုံးအဖြတ်ပေးသည့်အချက်မှာ ခရမ်းလွန်ရောင်ခြည် စုပ်ယူမှုအားကောင်းပြီး အားကောင်းသော fluorescence ရှိသည်။
2. ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်း၏ရည်ရွယ်ချက်ကိုဆုံးဖြတ်ပါ- မြင့်မားသောခွဲခြားမှု၊ မြင့်မားသောကော်လံထိရောက်မှု၊ တိုတောင်းသောခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအချိန်၊ မြင့်မားသောအာရုံခံနိုင်စွမ်း၊ မြင့်မားသောဖိအားခံနိုင်ရည်၊ ရှည်လျားသောကော်လံအသက်၊ ကုန်ကျစရိတ်နည်းပါးခြင်းစသည်တို့ကိုလိုအပ်သည်။
- သင့်လျော်သော chromatographic ကော်လံကို ရွေးချယ်ပါ- အမှုန်အရွယ်အစား၊ ချွေးပေါက်အရွယ်အစား၊ အပူချိန်ခံနိုင်ရည်၊ pH ခံနိုင်ရည်၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှု၏ စုပ်ယူမှုစသည်ဖြင့် ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်အဖြည့်ခံ၏ ပေါင်းစပ်မှု၊ ဓာတုဗေဒဂုဏ်သတ္တိများကို နားလည်ပါ။
- အရည် chromatography ကော်လံများကို ရွေးချယ်ရန်အတွက် ထည့်သွင်းစဉ်းစားမှုများ
ဤအခန်းတွင် chromatography ကော်လံတစ်ခုအား ရွေးချယ်ရာတွင် ထည့်သွင်းစဉ်းစားရမည့်အချက်များကို chromatography ကော်လံ၏ ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာနှင့် ဓာတုဂုဏ်သတ္တိများ ရှုထောင့်မှ ဆွေးနွေးပါမည်။ 2.1 အဖြည့်ခံမက်ထရစ်
2.1.1 Silica gel matrix အရည် chromatography ကော်လံအများစု၏ filler matrix သည် silica gel ဖြစ်သည်။ ဤအဖြည့်ခံအမျိုးအစားသည် မြင့်မားသောသန့်ရှင်းစင်ကြယ်မှု၊ ကုန်ကျစရိတ်နည်းသော၊ မြင့်မားသောစက်မှုစွမ်းအားရှိပြီး အုပ်စုများ (ဥပမာ phenyl bonding၊ amino bonding၊ cyano bonding စသည်တို့) ကို ပြုပြင်ရန် လွယ်ကူသော်လည်း ၎င်းသည်းခံနိုင်သော pH တန်ဖိုးနှင့် အပူချိန်အတိုင်းအတာမှာ အကန့်အသတ်ရှိသည်- silica gel matrix fillers အများစု၏ pH အကွာအဝေးသည် 2 မှ 8 ဖြစ်သည်၊ သို့သော် အထူးပြုပြင်ထားသော silica gel bonded အဆင့်များ၏ pH အကွာအဝေးသည် 1.5 မှ 10 အထိကျယ်ပြန့်နိုင်ပြီး pH နိမ့်သောတွင်တည်ငြိမ်သော အထူးပြုပြင်ထားသော silica gel bonded အဆင့်များလည်းရှိပါသည်။ pH 1 မှ 8 တွင်တည်ငြိမ်သော Agilent ZORBAX RRHD Stablebond-C18 ကဲ့သို့သော၊ စီလီကာဂျယ်မက်ထရစ်၏ အထက်အပူချိန်ကန့်သတ်ချက်သည် အများအားဖြင့် 60 ℃ဖြစ်ပြီး အချို့သော ခရိုမာတီဂရပ်ဖစ်ကော်လံများသည် မြင့်မားသော pH တွင် အပူချိန် 40 ℃ ခံနိုင်ရည်ရှိသည်။
2.1.2 ပိုလီမာမက်ထရစ်ပိုလီမာဖြည့်စွက်စာများသည် အများအားဖြင့် polystyrene-divinylbenzene သို့မဟုတ် polymethacrylate ဖြစ်သည်။ ၎င်းတို့၏ အားသာချက်မှာ ကျယ်ပြန့်သော pH အကွာအဝေးကို ခံနိုင်ရည်ရှိပြီး 1 မှ 14 အတွင်း အသုံးပြုနိုင်ပြီး မြင့်မားသော အပူချိန်ကို ပိုမိုခံနိုင်ရည်ရှိခြင်း (80°C ထက် ကျော်လွန်နိုင်သည်)။ စီလီကာအခြေခံ C18 ဖြည့်စွက်စာများနှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက၊ ဤဖြည့်စွက်စာအမျိုးအစားသည် ပိုမိုပြင်းထန်သော ရေအားလျှပ်စစ်ရှိ၍ ပရိုတင်းပိုလီမာသည် ပရိုတင်းကဲ့သို့သော နမူနာများကို ခွဲထုတ်ရာတွင် အလွန်ထိရောက်မှုရှိပါသည်။ ၎င်း၏ အားနည်းချက်မှာ ကော်လံ၏ စွမ်းဆောင်ရည် နိမ့်ကျပြီး စက်ပိုင်းဆိုင်ရာ ခွန်အားသည် စီလီကာအခြေခံ ဖြည့်စွက်စာများထက် အားနည်းသည်။ 2.2 အမှုန်အမွှားပုံသဏ္ဍာန်
ခေတ်မီ HPLC ဖြည့်စွက်စာအများစုသည် လုံးပတ်အမှုန်များဖြစ်သော်လည်း တစ်ခါတစ်ရံ ၎င်းတို့သည် ပုံမှန်မဟုတ်သောအမှုန်များဖြစ်သည်။ လုံးပတ်အမှုန်များသည် ကော်လံနိမ့်ဖိအား၊ ပိုမိုမြင့်မားသော ကော်လံထိရောက်မှု၊ တည်ငြိမ်မှုနှင့် အသက်ပိုရှည်မှုကို ပေးစွမ်းနိုင်သည်။ မြင့်မားသော viscosity mobile phases (ဥပမာ phosphoric acid) ကိုအသုံးပြုသောအခါ သို့မဟုတ် နမူနာအဖြေသည် ပျစ်လာသောအခါ၊ ပုံမမှန်သောအမှုန်များသည် အဆင့်နှစ်ဆင့်၏ အပြည့်အဝလုပ်ဆောင်မှုအတွက် ပိုမိုသင့်လျော်သည့် ပိုကြီးသော သီးခြားမျက်နှာပြင်ဧရိယာရှိသည်၊ စျေးနှုန်းမှာ အတော်လေးနိမ့်ပါသည်။ 2.3 အမှုန်အမွှားအရွယ်အစား
အမှုန်အရွယ်အစား သေးငယ်လေ၊ ကော်လံထိရောက်မှု မြင့်မားလေဖြစ်ပြီး ခွဲထွက်မှု မြင့်မားလေလေ၊ သို့သော် ဖိအားခံနိုင်ရည် မြင့်မားလေလေဖြစ်သည်။ အသုံးအများဆုံးကော်လံမှာ 5 μm အမှုန်အမွှားအရွယ်အစားကော်လံဖြစ်သည်။ ခွဲထွက်မှု လိုအပ်ချက် မြင့်မားပါက၊ အချို့သော ရှုပ်ထွေးသော matrix နှင့် အစိတ်အပိုင်းများစွာနမူနာများ၏ ခွဲထွက်ခြင်းပြဿနာကို ဖြေရှင်းရန် အထောက်အကူဖြစ်စေသော 1.5-3 μm အဖြည့်ခံကို ရွေးချယ်နိုင်ပါသည်။ UPLC သည် 1.5 μm အဖြည့်ခံများကို အသုံးပြုနိုင်သည်။ 10 μm သို့မဟုတ် ပိုကြီးသော အမှုန်အမွှားအရွယ်အစား ဖြည့်စွက်စာများကို semi-preparative သို့မဟုတ် preparative columns များအတွက် အသုံးပြုလေ့ရှိသည်။ 2.4 ကာဗွန်ပါဝင်မှု
ကာဗွန်ပါဝင်မှုသည် သီးခြားမျက်နှာပြင်ဧရိယာနှင့် bonded phase coverage တို့နှင့်ဆက်စပ်သော ဆီလီကာဂျယ်၏မျက်နှာပြင်ပေါ်ရှိ ချည်နှောင်ထားသောအဆင့်၏အချိုးအစားကို ရည်ညွှန်းသည်။ မြင့်မားသောကာဗွန်ပါဝင်မှုမြင့်မားသောကော်လံစွမ်းရည်နှင့် မြင့်မားသောကြည်လင်ပြတ်သားမှုကို ပေးစွမ်းပြီး မြင့်မားသောခွဲခြားမှုလိုအပ်သော ရှုပ်ထွေးသောနမူနာများအတွက် မကြာခဏအသုံးပြုလေ့ရှိသော်လည်း အဆင့်နှစ်ဆင့်ကြားတွင် ရှည်လျားသောအပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှုအချိန်ကြောင့်၊ ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအချိန်သည် ရှည်လျားပါသည်။ ကာဗွန်ပါဝင်မှုနည်းသော ခရိုမာတိုဂရပ်ဖစ်ကော်လံများသည် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအချိန်တိုတိုနှင့် မတူညီသောရွေးချယ်မှုများကို ပြသနိုင်ပြီး လျင်မြန်သောခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုလိုအပ်သည့် ရိုးရှင်းသောနမူနာများနှင့် မြင့်မားသော aqueous အဆင့်အခြေအနေများလိုအပ်သည့် နမူနာများကို အသုံးပြုလေ့ရှိသည်။ ယေဘူယျအားဖြင့် C18 ၏ ကာဗွန်ပါဝင်မှုသည် 7% မှ 19% အထိ ရှိပါသည်။ 2.5 ချွေးပေါက်အရွယ်အစားနှင့် မျက်နှာပြင်ဧရိယာ အတိအကျ
HPLC စုပ်ယူမှုမီဒီယာသည် သေးငယ်သော အမှုန်အမွှားများဖြစ်ပြီး ချွေးပေါက်များအတွင်း အပြန်အလှန်တုံ့ပြန်မှု အများစုဖြစ်သည်။ ထို့ကြောင့် မော်လီကျူးများသည် စုပ်ယူကာ ခွဲထုတ်ရန် ချွေးပေါက်များအတွင်းသို့ ဝင်ရောက်ရမည်ဖြစ်သည်။
ချွေးပေါက်အရွယ်အစားနှင့် တိကျသော မျက်နှာပြင်ဧရိယာသည် ပေါင်းစပ်သဘောတရား နှစ်ခုဖြစ်သည်။ သေးငယ်သော ချွေးပေါက်အရွယ်အစားဆိုသည်မှာ ကြီးမားသော သီးခြားမျက်နှာပြင်ဧရိယာကို ဆိုလိုပြီး အပြန်အလှန်အားဖြင့်။ ကြီးမားသောတိကျသောမျက်နှာပြင်ဧရိယာသည် နမူနာမော်လီကျူးများနှင့် နှောင်ဖွဲ့ထားသည့်အဆင့်များကြား အပြန်အလှန်အကျိုးသက်ရောက်မှုကို တိုးမြင့်စေနိုင်သည်၊ ထိန်းထားနိုင်မှုကို မြှင့်တင်ရန်၊ နမူနာတင်ဆောင်မှုနှင့် ကော်လံစွမ်းရည်ကို တိုးမြင့်လာစေရန်နှင့် ရှုပ်ထွေးသောအစိတ်အပိုင်းများကို ခွဲထုတ်နိုင်သည်။ Fully Porous fillers သည် ဤဖြည့်သွင်းအမျိုးအစားတွင် ပါ၀င်သည်။ ခြားနားမှုလိုအပ်ချက်မြင့်မားသောသူများအတွက်၊ ကြီးမားသောတိကျသောမျက်နှာပြင်ဧရိယာပါသောဖြည့်စွက်စာများကိုရွေးချယ်ရန်အကြံပြုထားသည်။ သေးငယ်သော သီးခြားမျက်နှာပြင်ဧရိယာသည် နောက်ကျောဖိအားကို လျှော့ချနိုင်ပြီး ကော်လံထိရောက်မှုကို မြှင့်တင်နိုင်ပြီး gradient ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွက် သင့်လျော်သည့် မျှခြေအချိန်ကို လျှော့ချနိုင်သည်။ Core-shell fillers များသည် ဤဖြည့်သွင်းအမျိုးအစားတွင် ပါဝင်သည်။ ခွဲထုတ်ခြင်းကိုသေချာစေရန်အလို့ငှာ၊ မြင့်မားသောခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုထိရောက်မှုလိုအပ်ချက်များရှိသူများအတွက်အထူးသီးသန့်မျက်နှာပြင်ဧရိယာသေးငယ်သောဖြည့်စွက်စာများကိုရွေးချယ်ရန်အကြံပြုထားသည်။ 2.6 Pore ထုထည်နှင့် စက်ပိုင်းဆိုင်ရာ ခွန်အား
Pore Volume ကို "pore volume" ဟုလည်းသိကြပြီး၊ သည် တစ်ယူနစ်အမှုန်တစ်ခုအတွက် ပျက်ပြယ်သောအသံပမာဏကို ရည်ညွှန်းသည်။ ၎င်းသည် filler ၏စက်ပိုင်းဆိုင်ရာအားကိုကောင်းစွာထင်ဟပ်နိုင်သည်။ ချွေးပေါက်ကျယ်သော ပမာဏရှိသော အဖြည့်ခံများ၏ စက်ပိုင်းဆိုင်ရာ ခွန်အားသည် သေးငယ်သော ချွေးပေါက်ကျယ်သည့် အဖြည့်ခံများထက် အနည်းငယ် အားနည်းပါသည်။ 1.5 mL/g ထက်နည်းသော သို့မဟုတ် ညီမျှသော pore volume ရှိသော အားဖြည့်ပစ္စည်းများကို HPLC ခွဲခြားခြင်းအတွက် အများစုအသုံးပြုကြပြီး 1.5 mL/g ထက်ကြီးသော pore volume ရှိသော fillersများကို molecular exclusion chromatography နှင့် low-pressure chromatography အတွက် အဓိကအသုံးပြုပါသည်။ 2.7 ကန့်သတ်နှုန်း
Capping သည် ဒြပ်ပေါင်းများနှင့် ထိတွေ့ထားသော silanol အုပ်စုများကြား အပြန်အလှန်ဆက်ဆံမှုကြောင့် ဖြစ်ပေါ်လာသော အမြီးအတက်များကို လျှော့ချနိုင်သည် (ဥပမာ အယ်ကာလိုင်းဒြပ်ပေါင်းများနှင့် silanol အုပ်စုများကြားတွင် အိုင်ယွန်းချိတ်ဆက်မှု၊ van der Waals တပ်ဖွဲ့များနှင့် အက်ဆစ်ဒြပ်ပေါင်းများနှင့် silanol အုပ်စုများကြားရှိ ဟိုက်ဒရိုဂျင်နှောင်ကြိုးများ)၊ ထို့ကြောင့် ကော်လံထိရောက်မှုနှင့် အမြင့်ဆုံးပုံသဏ္ဍာန်ကို တိုးတက်စေသည် . Uncapped bonded phases များသည် အထူးသဖြင့် ဝင်ရိုးစွန်းနမူနာများအတွက် capped bonded အဆင့်များနှင့် သက်ဆိုင်သည့် မတူညီသော ရွေးချယ်မှုများကို ထုတ်ပေးမည်ဖြစ်ပါသည်။
- မတူညီသောအရည် ခရိုမာတိုဂရမ်ကော်လံများ၏ အသုံးချမှုနယ်ပယ်
ဤအခန်းတွင် အချို့ကိစ္စများတွင် အရည် chromatography ကော်လံများ အမျိုးအစားအမျိုးမျိုး၏ အသုံးချမှုနယ်ပယ်ကို ဖော်ပြပါမည်။
3.1 Reverse-phase C18 chromatographic ကော်လံ
C18 ကော်လံသည် အော်ဂဲနစ်ဒြပ်စင်အများစု၏ ပါဝင်မှုနှင့် အညစ်အကြေးစမ်းသပ်မှုများကို ဖြည့်ဆည်းပေးနိုင်သည့် အလယ်အလတ်ဝင်ရိုးစွန်း၊ အားနည်းသော ဝင်ရိုးစွန်းနှင့် ဝင်ရိုးစွန်းမဟုတ်သော အရာများနှင့် သက်ဆိုင်သည့် အသုံးအများဆုံး ပြောင်းပြန်အဆင့်ကော်လံဖြစ်သည်။ C18 chromatographic ကော်လံ၏ အမျိုးအစားနှင့် သတ်မှတ်ချက်ကို သီးခြားခွဲထွက်မှုလိုအပ်ချက်များနှင့်အညီ ရွေးချယ်သင့်သည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ မြင့်မားသောခွဲခြားမှုလိုအပ်ချက်ရှိသော အရာဝတ္ထုများအတွက် 5 μm*4.6 mm*250 mm သတ်မှတ်ချက်များကို မကြာခဏအသုံးပြုလေ့ရှိသည်။ ရှုပ်ထွေးသော ခွဲခြားမှုမက်ထရစ်များနှင့် အလားတူဝင်ရိုးစွန်းရှိသော အရာများအတွက်၊ 4 μm*4.6 mm*250 mm သတ်မှတ်ချက်များ သို့မဟုတ် သေးငယ်သော အမှုန်အရွယ်အစားများကို အသုံးပြုနိုင်သည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ စာရေးသူသည် celecoxib API ရှိ genotoxic အညစ်အကြေးနှစ်ခုကိုရှာဖွေရန် 3 μm*4.6 mm*250 mm ကော်လံကိုအသုံးပြုခဲ့သည်။ အရာဝတ္ထုနှစ်ခုကို ခွဲထုတ်ခြင်းသည် 2.9 သို့ရောက်ရှိနိုင်ပြီး အလွန်ကောင်းမွန်ပါသည်။ ထို့အပြင်၊ ခွဲထုတ်ခြင်းကိုသေချာစေရန်အကျဉ်းချုပ်အောက်တွင်၊ လျင်မြန်စွာခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်လိုအပ်ပါက 10 mm သို့မဟုတ် 15 mm အတိုကော်လံကို မကြာခဏရွေးချယ်သည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ စာရေးသူသည် piperaquine phosphate API တွင် genotoxic impurity ကိုရှာဖွေရန် LC-MS/MS ကိုအသုံးပြုသောအခါ၊ 3 μm*2.1 mm*100 mm ကော်လံကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ အညစ်အကြေးနှင့် အဓိက အစိတ်အပိုင်းကြား ပိုင်းခြားခြင်းမှာ 2.0 ဖြစ်ပြီး နမူနာကို ထောက်လှမ်းခြင်း 5 မိနစ်အတွင်း ပြီးမြောက်နိုင်ပါသည်။ 3.2 ပြောင်းပြန်အဆင့် ဖီနဲလ်ကော်လံ
Phenyl ကော်လံသည် ပြောင်းပြန်အဆင့်ကော်လံအမျိုးအစားတစ်ခုလည်းဖြစ်သည်။ ဤကော်လံအမျိုးအစားသည် အနံ့ရှိသော ဒြပ်ပေါင်းများအတွက် ပြင်းထန်သော ရွေးချယ်နိုင်စွမ်းရှိသည်။ သာမန် C18 ကော်လံဖြင့် တိုင်းတာသော ရနံ့ရှိသော ဒြပ်ပေါင်းများ၏ တုံ့ပြန်မှု အားနည်းပါက၊ သင်သည် ဖီနဲလ်ကော်လံကို အစားထိုးရန် စဉ်းစားနိုင်သည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ ကျွန်ုပ်သည် celecoxib API ကိုပြုလုပ်သောအခါ၊ တူညီသောထုတ်လုပ်သူ၏ phenyl ကော်လံနှင့် တူညီသောသတ်မှတ်ချက် (5 μm*4.6 mm*250 mm) ၏ အဓိကအစိတ်အပိုင်းတုံ့ပြန်မှုသည် C18 ကော်လံထက် 7 ဆခန့်ဖြစ်သည်။ 3.3 ပုံမှန်အဆင့်ကော်လံ
ပြောင်းပြန်-အဆင့်ကော်လံအတွက် ထိရောက်သောဖြည့်စွက်စာအဖြစ်၊ ပုံမှန်အဆင့်ကော်လံသည် အလွန်ဝင်ရိုးစွန်းဒြပ်ပေါင်းများအတွက် သင့်လျော်သည်။ အကယ်၍ ပြောင်းပြန်အဆင့်ကော်လံတွင် 90% ကျော်သော aqueous phase ကို eluting လုပ်သောအခါတွင် peak သည် အလွန်လျင်မြန်နေသေးသော်လည်း၊ solvent peak နှင့် နီးကပ်ပြီး ထပ်နေပါက၊ normal-phase column ကို အစားထိုးရန် စဉ်းစားနိုင်ပါသည်။ ဤကော်လံအမျိုးအစားတွင် hilic ကော်လံ၊ အမိုင်နိုကော်လံ၊ cyano ကော်လံ စသဖြင့် ပါဝင်သည်။
3.3.1 Hilic ကော်လံ Hilic ကော်လံသည် အများအားဖြင့် ဝင်ရိုးစွန်းအရာများကို တုံ့ပြန်မှုကို မြှင့်တင်ရန်အတွက် ပေါင်းစပ်ထားသော အယ်လ်ကီကွင်းဆက်တွင် hydrophilic အုပ်စုများကို မြှုပ်နှံထားသည်။ ဤကော်လံအမျိုးအစားသည် သကြားဓာတ်များကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် သင့်လျော်သည်။ စာရေးသူသည် xylose နှင့် ၎င်း၏ ဆင်းသက်လာသော အကြောင်းအရာများနှင့် ဆက်စပ်ပစ္စည်းများကို ပြုလုပ်သည့်အခါ ဤကော်လံအမျိုးအစားကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ xylose ဆင်းသက်လာမှု၏ isomers များကို ကောင်းစွာ ခွဲခြားနိုင်သည်။
3.3.2 Amino ကော်လံ နှင့် cyano ကော်လံ Amino ကော်လံ နှင့် cyano ကော်လံတို့သည် ချည်နှောင်ထားသော alkyl ကွင်းဆက်၏အဆုံးတွင် အသီးသီးသော အမိုင်နိုကော်လံများကို ပေါင်းစပ်ထားသော အယ်လ်ကီကွင်းဆက်၏ နိဒါန်းကို ရည်ညွှန်းသည်၊ အထူးဒြပ်ပစ္စည်းများအတွက် ရွေးချယ်နိုင်စွမ်းကို တိုးတက်စေရန် ရည်ညွှန်းသည်- ဥပမာ၊ အမိုင်နိုကော်လံသည် ကောင်းသောရွေးချယ်မှုဖြစ်သည် သကြား၊ အမိုင်နိုအက်ဆစ်၊ ဘေ့စ်၊ နှင့် amides ခွဲခြားခြင်းအတွက်၊ ပေါင်းစည်းထားသောနှောင်ကြိုးများရှိနေခြင်းကြောင့် ဟိုက်ဒရိုဂျင်ပါသော နှင့် ဟိုက်ဒရိုဂျင်မပါသောဖွဲ့စည်းပုံဆိုင်ရာအလားတူပစ္စည်းများကို ခွဲထုတ်သောအခါ cyano ကော်လံသည် ပိုမိုကောင်းမွန်သောရွေးချယ်နိုင်စွမ်းရှိသည်။ Amino ကော်လံနှင့် cyano ကော်လံကို ပုံမှန်အဆင့်ကော်လံနှင့် ပြောင်းပြန်အဆင့်ကော်လံအကြား မကြာခဏပြောင်းနိုင်သော်လည်း မကြာခဏပြောင်းခြင်းကို မအကြံပြုပါ။ 3.4 Chiral ကော်လံ
နာမည်အကြံပြုထားသည့်အတိုင်း Chiral ကော်လံသည် အထူးသဖြင့် ဆေးဝါးနယ်ပယ်တွင် chiral ဒြပ်ပေါင်းများကို ခွဲခြားခြင်းနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက် သင့်လျော်သည်။ သမားရိုးကျပြောင်းပြန်အဆင့်နှင့် ပုံမှန်အဆင့်ကော်လံများသည် isomers ခွဲခြားမှုကို မအောင်မြင်သောအခါတွင် ဤကော်လံအမျိုးအစားကို ထည့်သွင်းစဉ်းစားနိုင်သည်။ ဥပမာအားဖြင့်၊ စာရေးသူသည် 1,2-diphenylethylenediamine ၏ isomers နှစ်ခုကို ပိုင်းခြားရန် 5 μm*4.6 mm*250 mm chiral column ကိုအသုံးပြုခဲ့သည်- (1S, 2S)-1, 2-diphenylethylenediamine နှင့် (1R, 2R)-1, 2 -diphenylethylenediamine နှင့် နှစ်ခုကြား ခြားနားမှုသည် 2.0 ခန့်အထိရောက်ရှိခဲ့သည်။ သို့သော်၊ chiral ကော်လံများသည် အများအားဖြင့် 1W+/piece သည် အခြားကော်လံများထက် ဈေးပိုကြီးသည်။ ထိုသို့သော ကော်လံများ လိုအပ်ပါက ယူနစ်သည် လုံလောက်သော ဘတ်ဂျက်တစ်ခု ပြုလုပ်ရန် လိုအပ်ပါသည်။ 3.5 အိုင်းယွန်းလဲလှယ်ကော်လံ
အိုင်းယွန်းလဲလှယ်ကော်လံများသည် အိုင်းယွန်းများ၊ ပရိုတင်းများ၊ နျူကလိခ်အက်ဆစ်နှင့် သကြားဓာတ်အချို့ကဲ့သို့သော အားသွင်းအိုင်းယွန်းများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက် သင့်လျော်သည်။ ဖြည့်သွင်းအမျိုးအစားအရ ၎င်းတို့ကို cation လဲလှယ်သည့်ကော်လံများ၊ anion လဲလှယ်ကော်လံများနှင့် အားကောင်းသော cation လဲလှယ်ကော်လံများအဖြစ် ပိုင်းခြားထားသည်။
Cation exchange ကော်လံများတွင် ကယ်လ်စီယမ်အခြေခံ နှင့် ဟိုက်ဒရိုဂျင်အခြေခံကော်လံများ ပါ၀င်သည် ဥပမာအားဖြင့်၊ စာရေးသူသည် ကယ်လ်စီယမ်ဂလူးကိုနိတ်နှင့် ကယ်လ်စီယမ်အက်ဆစ်တို့ကို ခွဲခြမ်းစိပ်ဖြာသည့်အခါ ကယ်လ်စီယမ်အခြေခံကော်လံများကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ ဒြပ်စင်နှစ်ခုစလုံးသည် λ=210nm တွင် ပြင်းထန်သောတုံ့ပြန်မှုများရှိပြီး ခွဲထွက်မှုဒီဂရီသည် 3.0 သို့ရောက်ရှိခဲ့သည်။ စာရေးသူသည် ဂလူးကို့စ်နှင့်ပတ်သက်သော အရာများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရာတွင် ဟိုက်ဒရိုဂျင်အခြေခံကော်လံများကို အသုံးပြုခဲ့သည်။ ဆက်စပ်ပစ္စည်းအများအပြား - maltose၊ maltotriose နှင့် fructose - ကွဲပြားသော detectors များအောက်တွင် sensitivity မြင့်မားပြီး 0.5 ppm နှင့် ခွဲခြားမှုဒီဂရီ 2.0-2.5 အထိနည်းပါးသော ထောက်လှမ်းမှုကန့်သတ်ချက်ရှိသည်။
Anion exchange columns များသည် အော်ဂဲနစ်အက်ဆစ်နှင့် ဟေလိုဂျင်အိုင်းယွန်းများကဲ့သို့ anionic အရာများကို ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာရန်အတွက် အဓိကအားဖြင့် သင့်လျော်ပါသည်။ အားကောင်းသော cation ဖလှယ်သည့်ကော်လံများတွင် အိုင်ယွန်းလဲလှယ်နိုင်စွမ်းနှင့် ရွေးချယ်နိုင်စွမ်းမြင့်မားပြီး ရှုပ်ထွေးသောနမူနာများကို ခွဲထုတ်ခြင်းနှင့် ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာခြင်းအတွက် သင့်လျော်ပါသည်။
အထက်ဖော်ပြပါများသည် စာရေးသူ၏ကိုယ်ပိုင်အတွေ့အကြုံနှင့် ပေါင်းစပ်ထားသော ဘုံအရည် chromatography ကော်လံအများအပြား၏ အမျိုးအစားများနှင့် အသုံးချမှုအပိုင်းများကို နိဒါန်းတစ်ခုမျှသာဖြစ်သည်။ လက်တွေ့အသုံးအဆောင်များတွင် chromatographic ကော်လံများဖြစ်သည့် ကြီးမားသော pore chromatographic ကော်လံများ၊ small-pore chromatographic columns၊ affinity chromatography columns၊ multimode chromatographic columns၊ ultra-high performance liquid chromatography columns (UHPLC)၊ supercritical fluid chromatography ကော်လံများ ( SFC) စသည်တို့သည် မတူညီသော နယ်ပယ်များတွင် အရေးပါသော အခန်းကဏ္ဍမှ ပါဝင်ကြသည်။ နမူနာ၏ဖွဲ့စည်းပုံနှင့် ဂုဏ်သတ္တိများ၊ ခွဲခြားမှုလိုအပ်ချက်များနှင့် အခြားရည်ရွယ်ချက်များအလိုက် chromatographic ကော်လံအမျိုးအစားကို ရွေးချယ်သင့်သည်။
တင်ချိန်- ဇွန်လ ၁၄-၂၀၂၄